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​Antiviral Research |夏宇尘教授课题组开发新型CRISPR/Cas9 mRNA脂质纳米颗粒治疗乙型肝炎

来源:   浏览量:  更新时间:2023-05-04 16:34:24

近日,病毒学国家重点实验室夏宇尘教授与武汉大学医学研究院殷昊教授、昆明动物所林江维研究员合作在国际学术期刊Antiviral Research在线发表题为“Codelivery of Cas9 mRNA and guide RNAs edits hepatitis B virus episomal and integration DNA in mouse and tree shrew models”的研究论文。该研究利用脂质纳米颗粒(SM-102-based LNPs)递送Cas9 mRNA和gRNA完成基因编辑。在AAV HBV1.04小鼠、HBV转基因小鼠和HBV感染树鼩体内,该mRNA脂质纳米颗粒可以安全有效地编辑乙肝病毒(HBV)微染色体cccDNA和整合的HBV基因组,为CRISPR/Cas9系统开展乙型肝炎的基因治疗提供理论依据和技术支持。

全世界有2.96亿慢性HBV感染患者,给全球公共卫生安全造成了巨大的负担。目前的治疗手段可以在一定程度上控制HBV复制并减缓疾病进展,但很难实现慢性乙肝的完全治愈,主要原因在于病毒感染细胞后形成的微染色体cccDNA作为HBV复制的模板无法被清除。此外,整合到宿主基因组中的HBV DNA可以作为病毒表面抗原表达的来源,并且与肝癌的发生相关。

CRISPR/Cas9系统可以对靶基因特定位点的DNA进行编辑,具有简单、快捷、高效的优点,为诸多难治性病毒感染、血液病以及遗传病等疾病的治疗带来了曙光。但CRISPR/Cas9的分子量大,将其安全、高效的递送至体内靶器官具有一定的挑战性。尽管前期研究评估了基因编辑方法靶向HBV基因组的潜力,但并未在HBV感染的动物模型或免疫健全的cccDNA动物模型上系统的评估。本研究团队根据HBV A-D基因型中的21种亚基因型的保守区设计了72条gRNA,并于不同的细胞模型中筛选出含有两条gRNA的高效组合。利用mRNA-1273新冠肺炎疫苗中的可电离递送成分SM-102制备脂质纳米颗粒,发现SM-102-based LNPs可特异性的靶向肝实质细胞,且体内递送效率接近100 %。

夏宇尘课题组前期建立了基于复制缺陷型AAV-HBV新型HBV cccDNA小鼠模型(Xu et al. CMGH, 2022),本研究将包封Cas9 mRNA和gRNA组合的SM-102-based LNPs通过尾静脉递送至小鼠体内,发现小鼠血清中HBeAg和HBsAg的表达水平明显降低,肝脏中cccDNA的水平也明显降低,而血清中ALT、AST水平和肝脏组织形态未受影响。树鼩在系统进化上与灵长类动物密切相关,体型较小,在实验中支持HBV的感染。研究人员在树鼩中建立HBV感染后,注射SM-102-based LNPs可以有效抑制树鼩血清中和肝脏中HBV复制的各项指标,cccDNA经治疗后也显著降低。且树鼩肝脏中未检测到脱靶的发生。为了研究对整合HBV DNA的编辑,研究人员利用了整合1.28倍A基因型HBV基因组的转基因小鼠。纳米颗粒的治疗可显著抑制HBV复制指标。深度测序结果表明LNPs对整合的HBV DNA的编辑效率高达98%。有趣的是,在多个动物模型中,LNPs的治疗在抑制病毒复制的同时能有效回复肝脏中SMC5/6复合体的表达,进一步限制了病毒复制并提高了宿主基因组稳定性。值得注意的是,LNPs对cccDNA的编辑效率低于整合HBV DNA,提示cccDNA的开放状态以及感染细胞中cccDNA的多拷贝会影响治疗效果。

综上所述,该研究发现CRISPR/Cas9 mRNA递送系统可以在不影响宿主基因组的情况下、有效地编辑HBV cccDNA和整合的HBV基因组。该研究为高效、安全的将CRISPR/Cas9基因编辑技术应用于临床HBV感染的治疗提供了重要依据。

该研究该工作得到国家重点研发计划(2019YFA0802801、2018YFA0801401)、国家自然科学基金(81971936、31871345、32071442)、湖北省医学青年拔尖人才、湖北省创新研究群体(2020CFA015),中央高校基本科研业务费专项资金等项目资助。武汉大学基础医学院博士生易君祝、硕士生郭方腾和武汉大学医学研究院博士生雷薪霖、陈秋冰为该论文共同第一作者,殷昊教授、林江维研究员为共通讯作者,夏宇尘教授为最后通讯作者。

全文链接:https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0166354223000967

夏宇尘教授2018年通过海外高层次人才计划回国后一直致力于病毒性肝炎的研究,在乙肝病毒实验模型的建立、病毒宿主相互作用机制和新型抗病毒治疗手段上做了一系列的工作,作为通讯作者在Journal of Hepatology, Hepatology, Plos Pathogens, Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology,Journal of Virology,Antiviral Research等学术期刊发表多篇论文。实验室招收博士后1-2名,详情请联系yuchenxia@whu.edu.cn。