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武汉大学病毒学国家重点实验室在Cas12a脱靶研究方面取得的新成果

来源:admin   浏览量:  更新时间:2020-03-27 13:34:35

        2020325日,国际学术期刊Genome Biology在线发表了武汉大学病毒学国家重点实验室湖北细胞稳态重点实验室殷雷团队的研究论文,题A Cas12a ortholog with stringent PAM recognition followed by low off-target editing rates for genome editingPAM严格识别的Cas12a家族蛋白在基因编辑中体现低脱靶率

  CRISPR-Cas系统是细菌抵御病毒入侵的免疫防御系统,对入侵病毒基因组能特异性识别和高效切割并在各种基因组编辑中得到广泛的应用。前人研究成果表明AsCas12aLbCas12a核酸酶是以TTTV为最佳PAMprotospacer adjacent motif的基因组编辑工具,然而Cas12a对含CPAMCTTVTCTVTTCV等)也会部分识别。殷雷团队长期关注病原识别和药物分子设计,研究结果表明PAM识别的严格性可能是基因编辑中形成脱靶的重要因素之一Cas12a对含CPAM的部分识别会在这些非典型PAM的位点产生脱靶,引起额外的非标编辑。Cas12a家族中的AsCas12a s12aCeCas12aBfCas12a分别在对含CPAMCTTVTCTVTTCV等)有不同的识别特点和严格性。CeCas12a在体内体外对PAM的识别更为严格,在多个基因位点的脱靶效应高通量测序检测中,呈现的位于含CPAM位点脱靶编辑更少,具备细胞内低脱靶特征。该研究为基因编辑酶的低脱靶改造提供了潜在的新思路和候选分子。

  殷雷团队研究生陈鹏、周进和万义彬为共同第一作者殷雷教授为通讯作者该研究的共同作者还包括武汉大学生科院王琰和张兴华教授该工作得到了国家科技部和国家自然科学基金的资助。

 

全基因组水平高通量测序分析各种编辑蛋白特异性